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《全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法》(WS-T67-1996)
资料介绍
《全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法》(WS-T67-1996)
1主题内容与适用范围
本标准规定了血中胆碱酯酶活性的分光光度测定方法一一-硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法。本法最低检测浓度为2单位/1mL血。
本标准适用于正常人和接触有机磷类及氨基甲酸酯类农药者血中胆碱酯酶活性的测定。2原理
胆碱酯酶水解硫代乙酰胆碱(ASCh,Acetylthiocholine)生成硫代胆碱和乙酸。硫代胆碱与巯基显色剂5,5'-联硫代-双-2-硝基苯甲酸(DTNB,Dithio-bis-nitrobenzoic acid)反应形成黄色化合物5-巯基-2-硝基苯甲酸(TNB)。在波长 412 nm处比色定量。
3仪器
3.1分光光度计,5 mm比色杯。
3.2恒温水浴。
3.3离心机。
3.4血红蛋白吸管,20puL。
3.5刻度吸管0.5 mL,2.0 mL。
3.6
试管10 mL.
3.7
容量瓶10 mL.
3.81/10万天平。
4试剂
本标准所用试剂除另有说明外,均为分析纯试剂。
4.1实验用水:蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。
4.55,5'-联硫代-双-2-硝基苯甲酸(DTNB)溶液:称取19.8 mg DTNB,滴加磷酸盐缓冲液(4.2),搅拌,直至完全溶解,溶液透明(大约加2 mL),再用生理盐水(4.3)稀释至10 mL,置冰箱中保存,临用时以生理盐水稀释10倍。出现黄色即弃用。
4.6抑制剂-毒扁豆碱:取1 mg 左右柳酸毒扁豆碱,溶于0.5 mL生理盐水(4.3),临用时配制,严防污染其他试剂及器材。
4.71m mol/L谷胱甘肽标准溶液:精确称取3.07 mg 还原型谷胱甘肽用水溶解,移入10 mL容量瓶中,稀释至刻度。此液1mL相当于1 pu mol 谷胱甘肽。因其易被氧化,应于用时配制,水必须先经煮沸去氧冷却后使用。厂田样地iaに大
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《全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法》(WS-T67-1996).pdf | 257K |
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