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双光子激发荧光显微镜
资料介绍
基本原理
双光子激发荧光显微镜（Two-Photon Excitation Fluorescence Microscopy, TPEFM）基于双光子吸收理论，由Denk等人于1990年首次实现。其核心原理是：荧光探针分子在近红外光（通常700-1000nm）激发下，同时吸收两个光子，跃迁至激发态，随后通过辐射跃迁发射荧光（波长通常为400-600nm）。
与传统单光子激发相比，双光子激发具有以下特点：
激发光波长是发射光的两倍左右，符合能量守恒定律（E=hν）。
双光子吸收概率与激发光强度的平方成正比，仅在焦点处发生有效激发，实现三维空间定位。
采用近红外光激发，生物组织穿透深度可达500-1000μm，显著优于单光子显微镜（通常<100μm）。
系统组成
1. 光源系统
通常采用飞秒脉冲激光器（Femtosecond Laser），脉宽100-200飞秒，重复频率80-100MHz，输出波长可调谐（700-1100nm）。常见型号包括钛宝石激光器（Ti:Sapphire Laser）和光纤飞秒激光器。
2. 显微镜主体
以正置或倒置显微镜为基础，配备高数值孔径（NA）物镜（通常1.0-1.4NA，40-60倍），用于聚焦激发光并收集荧光信号。扫描系统多采用振镜扫描（Galvanometer Scanner）或共振扫描，实现快速成像。
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| 1773188942双光子激发荧光显微镜.docx | 15K |
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